猪急性腹泻综合征冠状病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立快速、灵敏且特异的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒（swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV）检测方法,本试验扩增SADS-CoV N基因保守区域将其克隆至pMD18-T载体。所构建的重组质粒pMD18-T-SADS-qN作为阳性质粒标准品,以其为模板建立一种SYBR Green荧光定量PCR检测方法。结果显示,所建立方法在3.31×10¹~3.31×10⁷拷贝·μL^-1模板量时,呈良好的线性关系,相关系数（R²）为0.997,斜率为-3.318。该方法特异性检测SADS-CoV;而猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）检测结果均为阴性。所构建的标准品检测灵敏度下限可以达到3.31×10¹拷贝·μL^-1,组内和组间变异系数均小于1%,表明其具有良好的灵敏性和重复性。用该方法检测SADS-CoV感染IPI-2I和IPEC-J2细胞后不同时间点和不同接毒剂量的复制情况,结果显示,SADS-CoV感染细胞后2 h病毒含量较低,在12~36 h病毒含量迅速增长,36 h后增长速度减缓且病毒含量维持在较高水平。分别用0、0.1、1 MOI SADS-CoV感染细胞结果显示病毒的mRAN转录水平呈现剂量依赖性增加,当MOI为1时,IPI-2I和IPEC-J2细胞病毒含量分别为10^6.7、10^5.3拷贝·mL^-1。进一步利用所建立的方法对经口服攻毒SADS-CoV仔猪的临床样本进行检测,结果发现病毒在空肠回肠含量较高,表明病毒主要定殖于空肠和回肠。综上表明,本研究建立SYBR Green荧光定量PCR检测方法能灵敏特异地检测SADS-CoV,为SADS-CoV的诊断和病毒相关基础研究提供可靠的检测手段。     

博落回急性及亚慢性毒性试验

博落回对小鼠经口急性毒性和对大鼠腹腔注射慢性毒性试验结果表明：博落回生物碱硫酸盐对昆明系小鼠的急性毒性为：水溶液ＬＤ５０＝９００ｍｇ·ｋｇ＾－１，水混悬液ＬＤ５０＝１０４３ｍｇ·ｋｇ＾－１，均属低毒级。博落回注射液对Ｗｉｓｔａｒ大鼠亚慢性毒作用的靶器官主要为肝，长时间或大剂量接毒引起肝细胞变性，增生，使雄性动物肝／体比明显增高，而血清谷－丙转氯酶下降。     

长效土霉素注射液的急性毒性及肌肉刺激性研究

为考察新型长效土霉素注射液的安全性,分别对小白鼠和家兔进行急性毒性和局部刺激性试验。随机将60只小白鼠分为6组,每组10只,其中雌雄各半,进行急性毒性试验考察;随机将9只家兔分为3组,每组3只,进行局部刺激性试验。结果表明,该新型长效土霉素注射液小鼠肌肉注射LD 50为600.32 mg/kg,LD 50的95%的可信区间为(600.32±2.44)mg/kg;随着时间延长和给药剂量增加,刺激性增强,注射长效土霉素7 d后,家兔股四头肌出现红肿、发紫、坏死、光泽消失现象,15 d后肌肉组织的坏死范围扩大。该产品对小白鼠表现为低毒,对家兔的股四头肌有局部刺激性。     

咪鲜安及其主要代谢物对常见水生动物的急性毒性研究

为全面正确评价味鲜安的生态环境效应和毒性，采用静态试验法，研究了味鲜安及其制剂和咪鲜安的主要代谢物对泥鳅、湘云鲫和蝌蚪的急性毒性作用．结果表明：咪鲜安制剂的毒性作用稍大于咪鲜安的；咪鲜安及其制剂对湘云鲫、泥鳅和蝌蚪的急性毒性从大到小的顺序为：蝌蚪、泥鳅、湘云鲫；咪鲜安(BTS 40542)及其主要代谢物(包括BTS 44595，BTS 44596和BTS 45186)对蝌蚪的毒性作用大于泥鳅的，其毒性从大到小依次为：BTS 45186，BTS 40542，BTS 44595，BTS 44596；在评价咪鲜安的生态环境效应时，不仅要注意咪鲜安母体及其使用制剂的残留与毒性，还要特别重视咪鲜安主要代谢物的残留与毒性．     

有机胂添加剂对蛋白核小球藻及大型蚤的急性毒性研究

为评估有机胂添加剂对水环境的影响,以蛋白核小球藻、大型蚤为研究对象,研究了洛克沙胂、阿散酸对蛋白核小球藻和大型蚤的急性毒性.结果表明:洛克沙胂、阿散酸对蛋白核小球藻的24、48、72、96 h的半数有效抑制浓度(EC50)分别为:190.55、263.03、346.74、389.05 mg·L-1;239.88、308.18、418.12、410.40 mg·L-1(以原型药物计);均大于100 mg·L-1,在水环境中为低毒级化合物(急性Ⅲ化学物质以下).对大型蚤24 h-EC50分别是49.77、83.70 mg·L-1;48 h-EC50分别是39.00、57.48 mg·L-1,48 h-LC50分别是44.19、61.97 mg·L-1(均以原型药物计);依据蚤类急性活动抑制毒性分级标准,它们属于中毒级化合物.     

Therapeutic Plasma Exchange for Venom-Induced Thrombotic Microangiopathy Following Hump-Nosed Pit Viper (Genus: Hypnale) Bites: A Prospective Observational Study

Introduction—Thrombotic microangiopathy (TMA), which is the triad of acute kidney injury (AKI), microangiopathic hemolytic anemia (MAHA), and thrombocytopenia, is a rare complication of snakebites, and in Sri Lanka, it is commonly seen with hump-nosed pit viper (HNPV) bites.Methods—We conducted a prospective observational study of patients with AKI caused by HNPV bites in Teaching Hospital, Ratnapura, Sri Lanka for 6 y, commencing in June 2015. Some patients with TMA underwent therapeutic plasma exchange (TPE) and some did not. These 2 groups were compared. Statistical analysis was carried out using Minitab 18.1. Data were presented as median (IQR).Results—There were 52 (8%) patients with TMA, of whom 21 (45%) were in the TPE group and 26 (55%) were in the non-TPE group. TPE improved time to platelet correction (4 d [IQR, 4–5 d] vs 7 d [IQR, 5–9 d]; P=0.009), time to MAHA correction (5 d [IQR, 3–4 d] vs 7 d [IQR, 6–9 d]; P=0.004), time to prothrombin time (PT)/international normalized ratio (INR) correction (1 d [IQR, 1–2 d] vs 3 d [IQR, 3–4 d]; P=0.003), and time to 20 min whole blood clotting test (WBCT20) correction (2 d [IQR, 1–2 d] vs 3 d [1QR 2–3 d]; P=0.020). Renal recovery was predicted by TPE (P=0.048) and highest creatinine level (P=0.001). There was no association between TPE and dialysis dependency at discharge (P=0.597), length of hospital stay (P=0.220), and the number of dialysis cycles prior to discharge (P=0.540). TPE did not improve the number of blood transfusions (5 packs [IQR, 3–8.5 packs] vs 4 packs [IQR, 0–9 packs]; P=0.290).Conclusions—TPE is effective for TMA in the early correction of platelet counts, MAHA, PT/INR, and WBCT20 in HNPV bites.     

铬(Ⅵ)和菲单一及复合暴露对赤子爱胜蚓的急性毒性效应研究

采用人工土壤试验方法,研究了重金属铬(Ⅵ)和多环芳烃菲单一及复合暴露对赤子爱胜蚓的急性毒性效应.单一暴露试验结果表明:铬(Ⅵ)对赤子爱胜蚓7 d和14 d的LC₅₀分别为259.98 mg·kg^-1和241.13 mg·kg^-1;菲对赤子爱胜蚓7 d和14 d的LC₅₀分别为88.01 mg·kg^-1和60.96 mg·kg^-1.铬(Ⅵ)和菲对赤子爱胜蚓都表现出明显的时间-浓度-效应关系,而且铬(Ⅵ)和菲对赤子爱胜蚓均具有一定毒性,菲的毒性大于铬(Ⅵ).采用铬(Ⅵ)和菲等毒性单位进行复合暴露试验,结果表明铬(Ⅵ)和菲混合物对蚯蚓7 d-LC₅₀中铬(Ⅵ)和菲所含浓度分别为151.73 mg·kg^-1和37.93 mg·kg^-1;14 d-LC₅₀中铬(Ⅵ)和菲所含浓度分别为 137.69 mg·kg^-1和34.42 mg·kg^-1,根据等效应线图判定其联合作用表现为相加作用.     

铜、镉、敌敌畏和甲胺磷对南美白对虾幼虾的急性致毒及相互关系

在恒温(25±1℃)和充气条件下,研究了铜、镉、敌敌畏和甲胺磷对南美白对虾的急性致毒效用,得到了铜、镉、敌敌畏、甲胺磷对幼虾的24hLC50、48hLC50、72hLC50、96hLC50,四种毒物的安全浓度分别为0.008、0.001、7.6×10-4、7.8×10-4mg/L,四种毒物的毒性大小顺序为甲胺磷＞敌敌畏＞Cd2+＞Cu2+.铜与敌敌畏、甲胺磷对南美白对虾幼虾的联合毒性作用为相加作用,镉与敌敌畏、甲胺磷的联合毒性作用为拮抗作用.     

大黄牡丹汤调控HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路干预急性胰腺炎模型大鼠的机制

旨在研究大黄牡丹汤对急性胰腺炎模型大鼠的干预作用及可能的分子机制。将96只大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、阳性药物对照组和大黄牡丹汤高、中、低3个剂量试验组（n=16）。采用胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠溶液复制急性胰腺炎模型,模型组及假手术组均采用灌胃方式给予生理盐水;对照组皮下注射奥曲肽;高、中、低3个剂量试验组分别灌胃不同剂量大黄牡丹汤水煎液,1次·d^-1,连续6 d。常规麻醉后脱颈椎处死,心脏取血,开腹剖取胰腺组织。在光学显微镜下对胰腺的病理学改变进行观察,采用IHC和Western blot法检测胰腺组织HMGB1、RAGE、p-NF-κBp65、p-IκBα蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测胰腺组织HMGB1、RAGE基因表达水平,ELISA检测胰腺组织中IL-1β、TNF-α、IL-6含量。结果发现：1）与假手术组相比,模型组大鼠一般生存状况较差,镜下可见胰腺组织明显肿胀以及扩张充血,胰腺组织中HMGB1、RAGE基因和蛋白相对表达量,下游蛋白NF-κBp65、IκBα磷酸化水平,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高（P<0.05）;2）与模型组相比,治疗组大鼠一般生存状况不同程度改善,镜下间质性水肿以及坏死灶明显改善,HMGB1、RAGE基因和蛋白相对表达量,下游蛋白NF-κBp65、IκBα磷酸化水平,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著下降（P<0.05）,其中,尤以大黄牡丹汤高剂量组最为明显（P<0.05）。本研究表明,大黄牡丹汤能够显著缓解大鼠急性胰腺炎疾病进展,其机制与其能够抑制HMGB1/RAGE/NF-κB通路激活,进而阻断炎性级联反应有关。